本生小鼠ELISA試劑盒操作步驟2022已更新(每日/實時)_技術文章

技術文獻

本生小鼠ELISA試劑盒操作步驟2022已更新(每日/實時)
閱讀次數(shù)：15368 發(fā)布時間：2022/10/13 14:46:09

分享到：

　　標簽：小鼠試劑盒 BUNSEN本生 ELISA試劑盒

　　本生小鼠ELISA試劑盒操作步驟

　　小鼠ELISA試劑盒的操作步驟：

　　影響反應因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA試劑盒，標準曲線的范圍一般較寬，曲線點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是理想的檢測區(qū)域。

　　測定小分子量物質(zhì)常用競爭法，其標準曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負相關。標準曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。注意圖中橫坐標為對數(shù)關系，這更有利于測定系統(tǒng)的表達。

　　1、血清

　　血清是常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單。

　　用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜，使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。)4℃1000×g離心20分鐘，仔細收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

　　ELSIA試劑盒采血過程中應避免溶血，因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染，因為菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導致檢測的假陽性。

　　2、血漿

　　用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本，標本采集后30min內(nèi)4℃1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。

　　常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等，檢測時還應仔細閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。

　　3、細胞培養(yǎng)上清

　　取細胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min，除去細胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

　　4、細胞裂解液

　　1)吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用胰酶消化細胞，加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細胞可省略。