天津本生闡述：甘油三酯(TG)檢測試劑盒_技術(shù)文章

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天津本生闡述：甘油三酯(TG)檢測試劑盒
閱讀次數(shù)：15404 發(fā)布時(shí)間：2022/12/13 14:57:16

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甘油三酯(TG)檢測試劑盒

PS1087 甘油三酯(TG)檢測試劑盒 GPO-PAD單試劑微板法 (psaitong)保存條件：-20℃ 避光 6個(gè)月
產(chǎn)品簡介

甘油三酯(Triglyceride，TG)又稱三酰甘油，是3分子長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，是人體內(nèi)含量多的脂類，大部分組織均可以利用甘油三酯分解產(chǎn)物供給能量，同時(shí)肝臟、脂肪等組織還可以進(jìn)行甘油三酯的合成，用酶學(xué)方法測定 TG 是生化檢測中的常用方法，其特點(diǎn)是：1、靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度均高；2、使用溫和的反應(yīng)條件；3、操作簡便；4、適用于自動(dòng)分析儀。
本公司甘油三脂(TG)檢測試劑盒(GPO-PAP 單試劑微板法)又稱磷酸甘油氧化酶法或磷酸甘油氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法等，其原理是甘油三脂被 LPL 水解為甘油和脂肪酸，后者經(jīng)甘油激酶和 ATP 磷酸化，G-3-P 被磷酸甘油氧化酶(GPO)氧化并產(chǎn)生過氧化氫，再經(jīng)過氧化物酶(POD)催化，使 4-氨基安替比林與酚(三者合稱 PAP)反應(yīng)，生成紅色benhun醌亞胺(Trinder 反應(yīng))，酶標(biāo)儀在 500~520nm 處進(jìn)行比色測定，用于人或動(dòng)物的血清、血漿、腦脊液、細(xì)胞、組織等樣本中的甘油三脂含量定量測定。該試劑盒僅用于科研域，不適用于臨床診斷或其他用途。

組分：

名稱		規(guī)格	儲(chǔ)存
試劑(A): GPO-PAP工作液	Good＇s Buffer	30mL	-20℃ 避光
	LPL、GK、GPO
	過氧化物酶(POD)
	4-氨基安替比林
	對氯酚
試劑(B): Glycerol 標(biāo)準(zhǔn)(1.7mmol/L)		1mL	4℃ 避光
試劑(C): ddH2O		1mL	RT

自備材料:

1、生理鹽水或PBS。

2、96 孔板或離心管、小試管。

3、水浴鍋或恒溫箱。

4、酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)。

5、全自動(dòng)或半自動(dòng)生化分析儀。

操作步驟(僅供參考)：

一、樣本處理
1、血清、血漿、腦脊液樣本：從待測樣本中分離出的血清或血漿不應(yīng)有溶血，直接檢測，如超過線性范圍，用生理鹽水稀釋后檢測。
2、細(xì)胞樣本
a:取適量的細(xì)胞(一般推薦＞10⁶以上)，1000g離心10min，棄上清，留取沉淀。
b:.用 PBS 或生理鹽水清洗 1-2 次，1000g離心10min，棄上清，留取沉淀。
c:加入200-300μl 的PBS或生理鹽水勻漿，冰浴條件下超聲破碎細(xì)胞，功率300W，每次3-5s，間隔30s,重復(fù)3-5次；亦可手動(dòng)勻漿，制備好的勻漿液不可離心；亦可用1-2% Triton X-100 冰浴 30-60min，制備好的裂解液不可離心。
3、組織樣本：準(zhǔn)確稱取適量組織樣本，按質(zhì)量(g)：生理鹽水或PBS(mL)=1：9的比例，加入生理鹽水或PBS，冰浴條件下手動(dòng)或機(jī)械勻漿，2500-3000g 離心10min，取上清待用。
二、酶標(biāo)儀TG測定操作:
1：按下表依次加入試劑：
加入物(μL)	空白孔	標(biāo)準(zhǔn)孔	待測孔
ddH₂O	3	-	-
Glycerol 標(biāo)準(zhǔn)(1.7mmol/L)	-	3	-
待測樣本	-	-	3
GPO-PAP 工作液	300	300	300
2：充分混勻, 37℃水浴中孵育5min。
3：酶標(biāo)儀測定 500-520nm 吸光度，以空白孔調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)孔和各待測孔的吸光度。
三、分光光度計(jì)(1ml 比色杯)、半自動(dòng)生化分析儀 TG 測定操作：
1、按下表依次加入試劑：
加入物(mL)	空白管	標(biāo)準(zhǔn)管	待測管
ddH₂O	0.01	-	-
Glycerol 標(biāo)準(zhǔn)(1.7mmol/L)	-	0.01	-
待測樣本	-	-	0.01
GPO-PAP 工作液	1	1	1
2、充分混勻, 37℃水浴中孵育5min。
3、分光光度計(jì)測定500-520nm吸光度，空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管和各待測管的吸光度。
四、普通分光光度計(jì)(2mL比色杯)TG 測定操作:
1、按下表依次加入試劑：
加入物(mL)	空白管	標(biāo)準(zhǔn)管	待測管
ddH₂O	0.02	-	-
Glycerol 標(biāo)準(zhǔn)(1.7mmol/L)	-	0.02	-
待測樣本	-	-	0.02
GPO-PAP 工作液	2	2	2
2、充分混勻, 37℃水浴中孵育5min。
3、分光光度計(jì)測定500-520nm吸光度，空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管和各待測管的吸光度。
五、全自動(dòng)生化分析儀 TG 測定操作:
1、按下表依次加入試劑：
加入物((μL)	空白管	標(biāo)準(zhǔn)管	待測管
ddH₂O	3	-	-
Glycerol 標(biāo)準(zhǔn)(1.7mmol/L)	-	3	-
待測樣本	-	-	3
GPO-PAP 工作液	300	300	300
2、充分混勻, 37℃水浴中孵育5min。
3、全自動(dòng)生化分析儀測定 500-520nm 波長處吸光度，以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管和各待測管的吸光度。

機(jī)器參數(shù)：

主波長/次波長	500/600nm
反應(yīng)類型	終點(diǎn)法
反應(yīng)方向	升反應(yīng)(+)

計(jì)算公式：

血清、血漿等液體樣本(空白調(diào)零)：

TG(mmol/L)=｛(待測管吸光度-空白吸光度)/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-空白吸光度)｝×1.7mmol/L

血清、血漿等液體樣本(全自動(dòng)生化分析儀)：

TGmmol/L)=(待測管吸光度/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度)×1.7mmol/L

細(xì)胞、組織等樣本(空白調(diào)零)：

TG(mmol/L)=｛ ( 待測管吸光度 - 空白吸光度 )/( 標(biāo) 準(zhǔn) 管吸光度 -空白吸光度 ) ｝×1.7mmol/L÷待測樣本濃度(mg/mL)

細(xì)胞、組織等樣本(全自動(dòng)生化分析儀)：

TG(mmol/L)=(待測管吸光度/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度)×1.7mmol/L÷待測樣本濃度(mg/mL)

參考區(qū)間：

健康成年人：

理想范圍：＜1.7mmol/L(＜150mg/dl)

邊緣升高：＜1.7-2.25mmol/L(150-199mg/dl)

升高：＜2.26-5.64mmol/L(200-499mg/dl)

很高：≥565mmol/L(≥500mg/dl)

性能指標(biāo)：

外觀	無色至淡黃色澄清液體
線性范圍	0.05-9.0mmol/L(4~790mg/dl)，R2>0.98
靈敏度	檢測下限 0.05mmol/L(4mg/dl)
變異系數(shù)	批內(nèi)<5%，批間<8%，總誤差<10%
空白吸光值	<0.2(1cm 光徑)
干擾因素	膽紅素<205μmol/L；血紅蛋白<6g/L；EDTA、肝素抗凝時(shí)，對結(jié)果無明顯影響。
穩(wěn)定性	密閉，6個(gè)月