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本生詳述:酵母選擇營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基2023已更新
閱讀次數(shù):15372 發(fā)布時間:2023/2/10 10:13:53
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  本生詳述:酵母選擇營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基

  一、選擇性營養(yǎng)缺陷型酵母培養(yǎng)基SD培養(yǎng)基(Synthetic Dropout Media)SC-Droupout

  酵母缺陷培養(yǎng)基種類:一缺培養(yǎng)基單缺培養(yǎng)基/二缺培養(yǎng)基雙缺培養(yǎng)基/三缺培養(yǎng)基/四缺培養(yǎng)基/五缺培養(yǎng)基

  (1) 一缺培養(yǎng)基:以SD-Ura(Sc-Ura培養(yǎng)基)為代表的此類酵母SC選擇培養(yǎng)基或SD缺陷培養(yǎng)基主要用于單質(zhì)粒酵母轉(zhuǎn)化篩選

  用途:外源基因在酵母中的表達(dá)、異源基因功能互補、酵母單雜交系統(tǒng)和酵母雙雜交系統(tǒng)初始質(zhì)粒轉(zhuǎn)化

  SD/-Trp, SD/-Leu, SD/-His, SD/-Ura, SD/-Met, SD/-Ade

  SC-Trp,SC-Leu, SC-His, SC-Ura, SC-Met, SC-Ade

  (2) 二缺培養(yǎng)基:此類酵母SC選擇培養(yǎng)基-SD培養(yǎng)基用于雙質(zhì)粒酵母轉(zhuǎn)化篩選

  用途:外源基因在酵母中的表達(dá)、異源基因功能互補、酵母單雜交系統(tǒng)和酵母雙雜交系統(tǒng)初始質(zhì)粒轉(zhuǎn)化

  免疫共沉淀(Coimmunoprecipitation)、Y187和AH109 酵母交配實驗、接合型二倍體篩選

  SD/-Trp-Leu,SD/-Trp-His,SD/-Trp-Ade,SD/-Leu-Ade,SD/-His-Ade, SD/-Leu-His, SD/-Ura-Trp, SD/-Ura-Leu,SD/-Ura -His

  SC-Trp-Leu, SC-Trp-His, SC-Trp-Ade, SC-Leu-Ade, SC-His-Ade, SC-Leu-His, SC-Ura-Trp, SC-Ura-Leu,SC -Ura-His

  (3) 三缺培養(yǎng)基:此類酵母SC選擇培養(yǎng)基-SD培養(yǎng)基用于雙質(zhì)粒酵母轉(zhuǎn)化篩選和報告基因檢測

  用途:外源基因在酵母中的表達(dá)、異源基因功能互補、酵母單雜交系統(tǒng)和酵母雙雜交系統(tǒng)報告基因檢測

  Y187和AH109 酵母交配實驗后報告基因分析(His3,Ade2)

  SD/-Trp-Leu-His ,SD/-Trp-Leu-Ade, SD/-Ura-Trp-His, SD/-Ura-Leu-His,SD/-Trp-His-Ade, SD/-Ura-Trp-Leu

  SC-Trp-Leu-His ,SC-Trp-Leu-Ade, SC-Ura-Trp-His, SC-Ura-Leu-His,SC-Trp-His-Ade, SC-Ura-Trp-Leu

  (4) 四缺培養(yǎng)基:此類酵母SC選擇培養(yǎng)基-SD培養(yǎng)基主要用于報告基因分析

  用途:酵母雙雜交系統(tǒng)和酵母三雜交系統(tǒng)報告基因檢測 、Y187和AH109 酵母交配實驗后報告基因分析(His3,Ade2)

  SD/-Trp-Leu-His-Ade, SD/-Ura-Trp-Leu-His, SD/-Ura-Trp-Leu-Met

  SC-Trp-Leu-His-Ade, SC-Ura-Trp-Leu-His, SC-Ura-Trp-Leu-Met

  (5) 五缺培養(yǎng)基:此類酵母SC選擇培養(yǎng)基-SD培養(yǎng)基主要用于報告基因分析和表型分析

  用途:酵母三雜交系統(tǒng)報告基因檢測(His3,Ade2)、酵母營養(yǎng)缺陷型分離鑒定和表型分析

  SD/-Trp-Leu-His-Ade-Met, SD/-Ura-Trp-Leu-His-Ade,SD/-Ura-Trp-Leu-His-Met,SD/-Ura-Trp-Leu-Ade-Met

  SD/-Ura-Leu-His-Ade-Met

  SC-Trp-Leu-His-Ade-Met, SC-Ura-Trp-Leu-His-Ade,SC-Ura-Trp-Leu-His-Met,SC-Ura-Trp-Leu-Ade-Met

  SC-Ura-Leu-His-Ade-Met

  (6) 六缺培養(yǎng)基:此類酵母SC選擇培養(yǎng)基-SD培養(yǎng)基主要用于報告基因分析、表型分析和藥物毒理分析

  用途:酵母三雜交系統(tǒng)報告基因檢測、酵母營養(yǎng)缺陷型分離鑒定和表型分析、藥物毒理分析

  SD/-Ura-Trp-Leu-His-Ade-Met, SC-Ura-Trp-Leu-His-Ade-Met

  上述培養(yǎng)基稱為選擇性營養(yǎng)缺陷型酵母培養(yǎng)基,主要用于酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化篩選,故又稱為酵母選擇培養(yǎng)基。

  培養(yǎng)基配制方法注意事項:

  1: 上述培養(yǎng)基含有各種所需成分(葡萄糖除外,因為有些研究者需要用其他糖類如用半乳糖誘導(dǎo)GAL1啟動子表達(dá)),為各種氨基酸和酵母含氮堿/酵母氮源的精細(xì)混合物干粉,按照8g/L稱取,加水后即可配制成相應(yīng)的培養(yǎng)液, 無需再購置添加Minimal SD Base或其他酵母氮源成分。高壓滅菌后加無菌葡萄糖至終濃度為2%(或棉子糖)或?qū)嶒炈璧奶囟ㄕT導(dǎo)物(如半乳糖用于GAL1啟動子誘導(dǎo)表達(dá)的劑量或濃度為2%)即可,適用于外源基因在酵母中的表達(dá),酵母單雜交(yeast one-Hybrid)和酵母雙雜交(yeast two-Hybrid)系統(tǒng)等的選擇缺陷型培養(yǎng),篩選含特定標(biāo)志基因的酵母表型。

  2: 在配制酵母缺陷培養(yǎng)基時,可以先加入葡萄糖后再高壓,對酵母的生長不會產(chǎn)生嚴(yán)重影響。但如加入葡萄糖后再高壓消毒則培養(yǎng)基會變色,由淺黃到深褐色不等,對細(xì)胞的生長還是有一定影響的(但在一般情況下不會影響實驗)。FunGenome suggestion: 由于氨基酸和葡萄糖在高溫高壓下可起化學(xué)反應(yīng),因此技術(shù)部不建議將葡萄糖加入后高壓,而建議用上述提示1的方法配制。

  3: FunGenome suggestion : 棉子糖和半乳糖原則上是不能高溫高壓的,因為在高溫高壓下其化學(xué)結(jié)構(gòu)會發(fā)生變化從而對誘導(dǎo)效果產(chǎn)生抑止,這一點特別提醒研究者務(wù)必注意,尤其是在做表達(dá)調(diào)節(jié)介導(dǎo)的功能互補實驗時至關(guān)重要!

  4:制備平皿即軟瓊脂半固體培養(yǎng)基(瓊脂粉按2%即每100ml加2克瓊脂粉)用于轉(zhuǎn)化篩選時,高壓需要將pH調(diào)至6.0左右(為方便起見,pH范圍可在5.6-6.5之間變化),而液體培養(yǎng)基則不需要調(diào)pH。

  酵母選擇營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基 本生生物公司供應(yīng):ELISA試劑盒,動物血清,熒光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量離心管,進(jìn)口凍存管,細(xì)胞培養(yǎng)皿,培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶,進(jìn)口吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過濾器等。

原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司

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