動(dòng)物血清的常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法!_技術(shù)文章

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動(dòng)物血清的常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法!
閱讀次數(shù)：15949 發(fā)布時(shí)間：2020/3/30 13:50:50

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動(dòng)物血清的常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法!

血清是細(xì)胞培養(yǎng)中*重要的元素。在實(shí)驗(yàn)室操作中要注意的事項(xiàng)及處理方法如下：

1. 血清保存 : 建議血清應(yīng)保存在-5至-2O。然而，若存放于4時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶，建議您無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。

2. 解凍血清的方法 : 建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

3. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?

血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但*普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白)在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。

若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過(guò)濾膜。

4. 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。

5. 有必要做熱滅活嗎?

實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或完全沒(méi)有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

6. 為什么儲(chǔ)存在冰箱中的胎牛血清會(huì)出現(xiàn)沉淀?

胎牛血清沒(méi)有預(yù)老化，儲(chǔ)存在2-8時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。這應(yīng)該不會(huì)影響血清的質(zhì)量。推薦在-20儲(chǔ)存胎牛血清，避免反復(fù)凍融。

7. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?

解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-20至4至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20至37)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

請(qǐng)勿將血清置于37太久。若在37放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。

血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。

若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。

注：以上資料僅供參考!

原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司