如何避免ELISA實驗中基質(zhì)效應(yīng)！_技術(shù)文章

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如何避免ELISA實驗中基質(zhì)效應(yīng)！
閱讀次數(shù)：15792 發(fā)布時間：2020/9/16 16:56:21

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   在ELISA實驗中，偶爾會遇到樣品濃度挨近試劑盒的靈敏度就容易發(fā)生樣本OD450值低于空白值的現(xiàn)象，特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果。

   什么是基質(zhì)效應(yīng)呢？

   首先我們要知道什么是基質(zhì)，基質(zhì)是指樣品中目標分析物以外的部分。由于基質(zhì)成分會對分析過程有顯著干擾，影響分析結(jié)果的準確性。業(yè)內(nèi)把這些影響統(tǒng)稱為基質(zhì)效應(yīng)。這是elisa試劑盒開發(fā)和使用中需要避開的雷。

   如何判斷是否是基質(zhì)效應(yīng)呢？

   當單個樣本或少量樣本值低于空白值時，可能是實驗操作出現(xiàn)問題，這時應(yīng)增加重復(fù)，進步操作技術(shù)。當許多樣本都低于空白值時，應(yīng)思考基質(zhì)效應(yīng)的影響，建立校正曲線予以修改�；|(zhì)效應(yīng)的原因錯綜復(fù)雜，有可能是樣品中存在的基質(zhì)導(dǎo)致原抗體的聯(lián)絡(luò)結(jié)合能力下降，便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現(xiàn)象。導(dǎo)致樣本值無法計算出數(shù)值，或許數(shù)值為負。

   雖然原因復(fù)雜，但有方法可以用來評估基質(zhì)效應(yīng)。

   種方法是采用線性稀釋，一般來講，抗原和捕獲抗體、檢測抗體之間的結(jié)合作用很強，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結(jié)合，而造成基質(zhì)效應(yīng)的非特異結(jié)合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結(jié)合造成的干擾會逐步減少，測量值也更接近真實值。沒有基質(zhì)效應(yīng)時，無論如何稀釋，測量值都和真實值吻合。而有基質(zhì)效應(yīng)時，稀釋會造成非特異性結(jié)合比例的減少，測量值也相應(yīng)地產(chǎn)生很大改變。

   第二種方法是摻入回收率實驗，將低、中和高濃度的分析物摻入到已測定過濃度的樣本中，摻入前后實測到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現(xiàn)。回收率介于80-120%，才符合標準。

原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司