本生闡述：細(xì)胞凍存管應(yīng)如何解凍? 2023已更新(每日/實(shí)時(shí))_技術(shù)文章

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本生闡述：細(xì)胞凍存管應(yīng)如何解凍? 2023已更新(每日/實(shí)時(shí))
閱讀次數(shù)：15319 發(fā)布時(shí)間：2023/5/9 15:21:22

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　　細(xì)胞凍存管應(yīng)如何解凍? 可能原因：

　　(1)胰蛋白酶消化過度

　　(2)支原體污染

　　(3)消化液或培養(yǎng)液配制錯(cuò)誤、過期儲存、儲存不當(dāng)

　　(4)細(xì)胞老化(如傳代細(xì)胞已匯合導(dǎo)致失去貼附性)

　　接種細(xì)胞起始濃度太低或太高解決辦法：

　　1. 準(zhǔn)備一個(gè)培養(yǎng)容器，內(nèi)裝合適體積的適宜培養(yǎng)基，并使其溫度和pH與建議的相稱。

　　2. 在37℃或該細(xì)胞系正常生長溫度水浴下通過輕柔搖動(dòng)迅速溶解凍存管(約2分鐘);

　　3. 管中內(nèi)容物溶解后立刻將凍存管移到超凈工作臺內(nèi)，并用70%酒精消毒表面防止污染，注意無菌操作。

　　4. 擰開凍存管蓋，將管中內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到已裝有少量培養(yǎng)液的無菌離心管中稀釋，離心(一般125g，10分鐘)，棄去上清并用1~2ml培養(yǎng)基重新懸浮沉淀細(xì)胞，然后轉(zhuǎn)移細(xì)胞懸浮液到培養(yǎng)容器內(nèi)混合均勻。注意：如果凍存液中含5% DMSO，則不必離心，只需用15ml培養(yǎng)液懸浮即可。因?yàn)镈MSO在這個(gè)濃度時(shí)沒有毒性。

　　5.24小時(shí)后檢查培養(yǎng)情況，如果需要的話進(jìn)行擴(kuò)傳。有些細(xì)胞系(比如雜交瘤細(xì)胞)從凍存狀態(tài)恢復(fù)需要幾天時(shí)間。實(shí)際上，一些雜交瘤細(xì)胞在天培養(yǎng)液中出現(xiàn)死亡細(xì)胞并產(chǎn)生許多細(xì)胞殘骸。許多細(xì)胞凍存后活力下降并在融化后24小時(shí)到一個(gè)狀態(tài)。此后細(xì)胞將恢復(fù)并進(jìn)入對數(shù)生。細(xì)胞復(fù)蘇過程不是很難，主要是速溶這步很關(guān)鍵。再有，細(xì)胞復(fù)蘇的狀態(tài)如何，較大程度上取決于細(xì)胞凍存時(shí)的操作。還有一點(diǎn)，細(xì)胞也是有思想的，你對他好，關(guān)心他照顧他，他也不會(huì)讓你失望的。

　　細(xì)胞凍存管本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。

原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司