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　　技術文獻分享-ELISA實驗中檢測抗原的方法

　　1、雙抗體夾心法

　　針對至少2個抗原決定簇的多價抗原。先介紹下抗原決定簇，抗原決定簇就是決定抗原性的特殊化學基團，也叫抗原表位，理論上個抗原決定簇能誘導產(chǎn)生種單克隆抗體。由6-12氨基酸或碳水基團組成，它可以是由連續(xù)序列(線性表位)組成或由不連續(xù)的蛋白質三維結構(構象表位)組成。臨床上具有2個抗原決定簇的多價抗原有很多，比較常見有HBSAG、AFP、HCG等大分子抗原。檢測步驟也簡單，就是包被、洗滌、加樣、洗滌、加樣、洗滌、顯色。具體說來是先將純化的相應抗體包被在固相載體上，再加入待測樣品，若其中含有待測抗原就會與固相抗體結合，洗掉雜質后，再加入酶標記的檢測抗體進行反應，洗掉多于的酶標抗體后，加入底物顯色，顯色與否以及顏色的深淺就代表了待測抗原是否存在以及相對含量。

　　對于雙抗體夾心法檢測大分子抗原要注意幾點：

　　(1)固相抗體和酶標檢測抗體定是分別針對待測抗原的兩個不同抗原決定簇，不然兩個抗體就會為爭同個決定簇而打架，會出現(xiàn)假陰性的不良結果。

　　(2)如果檢測的樣本是血清，就要注意風濕病患者體內(nèi)內(nèi)風濕因子RF這種奇葩異種抗體的存在，它能夠結合固相抗體和檢測抗體，造成假陽性的不良結果。

　　(3)包被的固相抗體含量定是高于樣品中的抗原含量，不然檢測到的含量會比實際含量低。

　　(4)如果想高端省事些，將待測樣品與酶標檢測抗體同時加入固相載體，在酶標檢測抗體高于樣品中的待測抗原的情況下出現(xiàn)假陰性結果，這種現(xiàn)象書本叫鉤狀效應。

　　2、競爭法

　　針對小分子抗原。這種方法也可以用于大分子抗原，只是相對雙抗夾心法這種強悍的策略，競爭法完全沒有優(yōu)勢，所以競爭法只在檢測小分子這個邊緣地帶發(fā)揮余熱了。臨床上主要用于T3、T4、孕酮等激素以及藥物等。檢測步驟與雙抗夾心法更簡單，包被、洗滌、加樣、洗滌、顯色，少了步加樣的過程，但是設計上復雜些，先將純化的相應抗體包被在固相載體上，然后每組樣本需要分兩組，組同時加入事先混勻好的酶標檢測抗原和樣本的混合物，組只加入酶標記抗原，兩組顏色差便是待測抗原的含量。

　　對于競爭法也需要注意點，酶標記抗原和待測樣本定要事先混勻好，然后同時加入固相載體，不然會造成不公平競爭，檢測出現(xiàn)偏差。

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