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　　小鼠脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒使用說明
 

　　小鼠脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的Adiponectin的ELISA試劑盒。

　　本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結(jié)果表明，小檢出量為36.5pg/ml，與人TNF-α、TWEAK等均沒有交叉反應，與大鼠Adiponectin有交叉反應，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

　　脂聯(lián)素(Adiponectin)，又稱Acrp30 (Adipocyte Complement-Related Protein)，adipoQ、apM1 (Adipose Most

　　Abundant Gene Transcript 1)或GBP28 (Gelatin-Binding Protein)，是一種分子量30kDa的糖蛋白，主要由脂肪細胞分泌，參與調(diào)控代謝和炎癥過程。成熟的小鼠脂聯(lián)素含有N端的膠原蛋白區(qū)域(66個氨基酸)和C端的C1q/TNF-α樣球狀區(qū)域(137個氨基酸)，與人和大鼠脂聯(lián)素分別具有83%和91%的氨基酸同源性。

　　脂聯(lián)素以90kDa的同源三聚體形式存在，其中兩個亞基以二硫鍵連接，第三個亞基以非共價鍵連接。兩個三聚體能夠通過共價鍵相連形成180kDa的六聚體復合物，六聚體又能形成分子量超過300kDa的HMW (High Molecular Weight)脂聯(lián)素。血漿中，不同脂聯(lián)素變體之間穩(wěn)定存在，不能發(fā)生互換。不同變體含量比例的高低具有明顯的生物學意義，在女性體內(nèi)，HMW脂聯(lián)素的濃度遠高于男性，三聚體和六聚體的脂聯(lián)素濃度在男女之間也有差別。血漿中脂聯(lián)素水平通常占總體血漿蛋白的0.01%左右。脂聯(lián)素通過與7次跨膜受體Adipo R1和Adipo R2作用發(fā)揮生物學活性，Adipo R1表達廣泛，與脂聯(lián)素的剪切形式gAdiponectin具有更高的親和力;Adipo R2則主要表達在肝臟上，與兩種形式的脂聯(lián)素親和力基本相同。不同形式的脂聯(lián)素同樣還能與肌肉中的鈣黏蛋白13和一些生長因子相互作用。

　　脂聯(lián)素通過調(diào)控葡萄糖和脂肪酸代謝增強胰島素敏感性，它能夠減少血漿中葡萄糖和甘油三酯濃度，升高胰高血糖素，但并不改變胰島素濃度。在肝臟中，脂聯(lián)素能夠增強胰島素對糖異生的抑制作用。在骨骼肌中，脂聯(lián)素能夠促進脂肪酸吸收并氧化，促進葡萄糖吸收和乳酸鹽產(chǎn)生。脂聯(lián)素的不同變體能夠特異性的激活肝臟和肌肉中的AMPK和NFκB通路。在成人體內(nèi)，總脂聯(lián)素水平與代謝綜合征成負相關(guān)，HMW脂聯(lián)素水平的減少與肥胖、胰島素抵抗、脂肪酸氧化減少、血脂異常、冠狀動脈疾病和動脈粥樣硬化形成相關(guān)。在接受胰島素增敏劑噻唑烷二酮類藥物治療時，血漿中HMW脂聯(lián)素水平會出現(xiàn)升高。

　　脂聯(lián)素與受體結(jié)合后可以通過激活LKB1、CaMKKβ或SIRT1參與調(diào)控AMPK的活化，活化的AMPK可以使胰島素受體底物的酪氨酸殘基磷酸化，磷酸化的胰島素受體底物募集并激活PI3K/AKT通路。

　　本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中小鼠Adiponectin的濃度，其原理見圖1。小鼠Adiponectin特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的小鼠Adiponectin會與捕獲抗體結(jié)合。當加入生物素化的抗小鼠Adiponectin抗體后，生物素化抗小鼠Adiponectin抗體與小鼠Adiponectin結(jié)合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。小鼠Adiponectin濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中小鼠Adiponectin濃度。

　　雙抗體夾心ELISA原理圖　　一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。

　　保存條件：

　　標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效;試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。

　　注意事項：

　　由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。

　　洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶溶解后再配制工作液。

　　為標準品的性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。

　　TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。

　　加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。

　　小鼠脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。

原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司