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本生詳述胎牛血清使用中遇到的常見問題
閱讀次數(shù):15827 發(fā)布時間:2021/1/11 16:03:47
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  本生詳述胎牛血清使用中遇到的常見問題

  1、 如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

  將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

  長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復(fù)凍融。

  我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時,請勿超過個月。若次無法用完瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。

  2、血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?

  沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另個無菌瓶里(般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。

  3、實驗室如何選擇適合的血清?

  國內(nèi)致認(rèn)為HYCLONE的血清是好的,但是根據(jù)我在北美的經(jīng)歷,國外般認(rèn)為GIBCO比HYCLONE好,所以并不是價格決定質(zhì)量,但是總的來說這兩種價格普遍偏貴,般不是太嬌氣的細(xì)胞,國產(chǎn)的就夠用了。

  4、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

  按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:

  (1)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均,減少沉淀的發(fā)生。

  (2) 血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均。

  (3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

  (4) 勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。

  (5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。

  (6) 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。

  5、小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項?

  來源不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

  組份與比例不同:兩者所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長,而有些細(xì)胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。

  血清保存和使用須注意:血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過個月。解凍血清時 ,應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會增加,血清在解凍和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存,避免反復(fù)凍融。

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