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技術(shù)文獻(xiàn)

人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)ELISA試劑盒
閱讀次數(shù):15742 發(fā)布時(shí)間:2021/1/26 11:28:02
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  人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)詳情

  產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T

  檢測范圍:5pg/ml-300pg/ml

  使用目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)含量。

  人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:

  本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)水平。用純化的人可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2),再與 HRP 標(biāo)記的可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值), 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)濃度。

  人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)ELISA試劑盒操作步驟:

  1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

  200pg/ml 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  100pg/ml 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  50pg/ml 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  25pg/ml 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  12.5pg/ml 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品*終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

  3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

  4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

  5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

  6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

  7.溫育:操作同 3。

  8.洗滌:操作同 5。

  9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

  10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

  11.測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度( OD 值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

  人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)ELISA試劑盒注意事項(xiàng):

  1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

  2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

  3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。次加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

  4.請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋定倍數(shù)( n 倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

  5.封板膜只限次性使用,以避免交叉污染。

  6.底物請避光保存。

  7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

  8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

  9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

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原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司

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