成人高潮1000部啪啪,后入内射国产一区二区,蜜桃狠狠狠狠狠狠狠狠狠,精品成人av一区二区三区

技術(shù)文獻(xiàn)

細(xì)胞凋亡實驗步驟及注意事項!
閱讀次數(shù):16037 發(fā)布時間:2021/3/1 11:26:20
分享到:

細(xì)胞凋亡實驗步驟及注意事項!

、實驗?zāi)康?/span>

1、掌屋凋亡細(xì)胞的形態(tài)特征

2、學(xué)會用熒光探針對細(xì)胞進(jìn)行雙標(biāo)記來檢測正;罴(xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的方法

二、實驗原理

細(xì)胞死亡根據(jù)其性質(zhì)、起源及生物學(xué)意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界,在生物個體和生存中起著非常重要的作用。它是細(xì)胞在定生理條件下系列順序發(fā)生事件的組合,是細(xì)胞遵循定規(guī)律自己結(jié)束生命的自主控制過程。細(xì)胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征。

在形態(tài)上可見凋亡細(xì)胞與周圍細(xì)胞脫離接觸,細(xì)胞變園,細(xì)胞膜向內(nèi)皺縮、胞漿濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、細(xì)胞核固縮破裂呈團塊狀或新月狀分布、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細(xì)胞膜進(jìn)步融合將細(xì)胞分成多個完整包裹的凋亡小體,凋亡小體后被吞噬細(xì)胞吞噬消化。在凋亡過程中細(xì)胞內(nèi)容物并不釋放到細(xì)胞外,不會影響其它細(xì)胞,因而不引起炎癥反應(yīng)。

在生物化學(xué)上,多數(shù)細(xì)胞凋亡的過程中,內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶活化,活性增加。核DNA隨機地在核小體的連接部位被酶切斷,降解為180-200bp或它的整倍數(shù)的各種片斷。如果對核DNA進(jìn)行瓊脂糖電泳,可顯示以180-200bp為基數(shù)的DNA ladder(梯狀帶紋)的特征。

相比之下,壞死是細(xì)胞處于劇烈損傷條件下發(fā)生的細(xì)胞死亡。細(xì)胞在壞死早期即喪失質(zhì)膜完整性,各種細(xì)胞器膨脹,進(jìn)而質(zhì)膜崩解釋放出其中的內(nèi)容物,引起炎癥反應(yīng),壞死過程中細(xì)胞核DNA雖也降解,但由于存在各種長度不等的DNA片斷,不能形成梯狀帶紋,而呈彌散狀。

些溫和的損傷刺激及些抗腫瘤藥物可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,通常這些因素在誘導(dǎo)凋亡的同時,也可產(chǎn)生細(xì)胞壞死,這取決于損傷的劇烈程度和細(xì)胞本身對刺激的敏感程度。

三尖杉酯堿(HT)是我國自行研制的種對急性粒細(xì)胞白血病,急性單核白血病等有良好療效的抗腫瘤藥物。研究表明HT在0.02~5μg/ml范圍內(nèi)作用2小時,即可誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡,并表現(xiàn)出典型的凋亡特征。本實驗用1μg/ml HT在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的HL-60細(xì)胞發(fā)生凋亡,同時也有少數(shù)細(xì)胞發(fā)生壞死。用Hoechst33342和碘化丙啶(propidium iodide,PI)對細(xì)胞進(jìn)行雙重染色,可以區(qū)別凋亡、壞死及正常細(xì)胞。

細(xì)胞膜是選擇性的生物膜,般的生物染料如PI等不能穿過質(zhì)膜。當(dāng)細(xì)胞壞死時,質(zhì)膜不完整,PI就進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,它可嵌入到DNA或RNA中,使壞死細(xì)胞著色,凋亡細(xì)胞和活細(xì)胞不著色。而些活細(xì)胞染料由于為親脂性物質(zhì),可跨膜進(jìn)入活細(xì)胞,因而可進(jìn)行活細(xì)胞染色。Hoechst33342是種活性熒光染料且毒性較弱,它是雙苯并咪唑的種衍生物。與DNA特異結(jié)合(主要結(jié)合于A-T)堿基區(qū)),顯示凋亡細(xì)胞和活細(xì)胞。凡是看到有凋亡小體的細(xì)胞都是凋亡細(xì)胞。

三、實驗用品

1、試劑:三尖杉酯堿(HT),300μg/ml,100mmol/L Tris-HCl(pH7.5),5mol/L EDTA緩沖液、堿性裂解液:0.2mol/L NaOH, 1%SDS、醋酸鈉:3mol/L KAc(pH4.8);異丙醇;70%乙醇;溴酚藍(lán),蔗糖指示劑。TBE電泳緩沖液,1%瓊脂糖,溴乙錠。PI母液:500μg/ml;Ho33342母液:2mmol/L。

2、儀器設(shè)備:熒光顯微鏡,電泳儀,電泳槽,微量加樣器(1ml,100μl)0.5、1.5ml離心管,載玻片,蓋玻片。

四、實驗材料

人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞,用含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基在37℃,5%CO2條件下培養(yǎng)。

五、方法步驟

1、三尖杉酯堿誘發(fā)HL-60細(xì)胞凋亡

(1)實驗約24小時,接種兩瓶HL-60細(xì)胞,標(biāo)記①、②,每瓶含約6ml培養(yǎng)液,置37℃,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

(2)實驗約2.5小時,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到70%,①號瓶加入三尖杉酯堿200μl,使終濃度為1μg/ml,②號瓶中加入同等量PBS(pH7.4)作對照。共同放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2.5小時。

2、Ho33342和PI雙重染色鑒別三種細(xì)胞

(1)染色:將瓶中的細(xì)胞搖勻取200μl于1.5ml的離心管中,加入Ho33342母液2μl,PI 20μl,染色15分鐘。

(2)滴片:取載玻片用雙面膠圍成小室,從離心管中各取以上染色后的細(xì)胞懸液10μl,加入小室內(nèi)蓋上蓋玻片,熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡下觀察,區(qū)別三種細(xì)胞,并注意三者比例。

六、注意事項

1、誘導(dǎo)培養(yǎng)HL-60細(xì)胞時間要準(zhǔn)確;

2、熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞時,由于熒光易碎滅,觀察時要盡量快。

原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司

產(chǎn)品搜索

請輸入要搜索的關(guān)鍵詞

聯(lián)系我們
  • 公司名稱:本生(天津)健康科技有限公司
  • 公司地址:天津市武清區(qū)汽車產(chǎn)業(yè)園
  • 公司電話:18502669006
  • 公司傳真:
  • 聯(lián)系人:陳媌媌
  • 手機:15502280048
  • 網(wǎng)址:http://www.bunsen17.com

本生(天津)健康科技有限公司:無菌盒裝吸頭寬口,ABI7500用八聯(lián)管,方形培養(yǎng)基瓶,SBS三碼合一冷凍管,0.1mlPCR單管,0.1mlPCR八連管,300ul無菌盒裝吸頭,4%組織細(xì)胞固定液,熒光定量PCR光學(xué)平蓋,無裙邊96孔PCR板,Roche480專用PCR96孔板,熒光定量PCR專用光學(xué)封板膜,Roche480專用輔助器,大鼠白介素6ELISA試劑盒,15ml尖底自立離心管,2.0ml帶鎖扣離心管,50ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶,無菌盒裝吸頭寬口,羊抗小鼠IgG-HRP,沃森200ul吸頭,一次性移液管,1000ul帶濾芯吸頭,一次性塑料培養(yǎng)皿,96孔深孔板,迪夫快速染色液,96孔可拆酶標(biāo)板,2.0ml帶鎖扣離心管,特級胎牛血清,人雙鏈RNA試劑盒,愛思進(jìn)0.2ml八連管PCR管
地址:天津市武清區(qū)汽車產(chǎn)業(yè)園 電話:18502669006 傳真: 技術(shù)支持:阿儀網(wǎng)  總訪問量:1375048

客服中心

客戶服務(wù)熱線

18502669006

18502669006


工作時間

8:30-17:30

展開客服

5

阿儀網(wǎng)推薦收藏該企業(yè)網(wǎng)站
日本少妇内射视频播放舔| 色综亚洲国产vv在线观看| 强被迫伦姧惨叫在线视频| 欧美三级午夜理伦三级| 国产日韩精品一区二区三区在线| 国产一区二区三区影院| 中文字幕久久熟女蜜桃| 国产亚洲成av人片在线观黄桃| 飘飘欲仙狼太郎| 北碚区| 亚洲欧美日韩一区| 蜜桃网站| 国产激情一区二区三区| 欧美贵妇videos性办公室| 搡老熟女中国老太| 四虎av| 成人h视频在线观看| 97超碰资源站| 孕交| 色久91小蝌蚪| 色www亚洲国产张柏芝| 国产噜噜噜噜噜久久久久久久久 | 久久久免费看| 国产精品不卡一区| 欧美美女色图| 国产精品区一区二区三含羞草| 日韩黄片在线看| 少妇久久久| 午夜久| 美味的交换韩剧中文字幕版| 真人第一次毛片| 欧美日韩亚洲精品瑜伽裤 | 色婷婷五月综合亚洲小说| 亚洲Va无码手机在线电影| AV无码久久久久不卡网站下载 | 亚洲精品亚洲人成人网| 久久久久黑人强伦姧人妻| 亚洲精品美女久久777777| 亚洲AV永久无码精品三区在线| 国产精品99久久免费观看| 久久精品国产亚洲77777|