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技術(shù)文獻

過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒技術(shù)說明書2023已更新報價
閱讀次數(shù):15299 發(fā)布時間:2023/7/10 10:00:44
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  過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒技術(shù)說明書
 

  規(guī)格:50T/48S

  注意:正式測定之選擇2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

  產(chǎn)品內(nèi)容:

  提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;

  試劑一:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;

  試劑二:液體 0.33mL×2 瓶,4℃保存;用時每瓶加入5mL 試劑一;用不完的試劑4℃保存一周;

  試劑三:液體 10 mL×1 瓶,4℃保存。

  產(chǎn)品說明:

  POD(EC 1.11.1.7)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物,具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。POD 催化 H2O2 氧化特定底物, 在470nm有特征光吸收。

  需自備的儀器和用品:

  可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

  過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒操作步驟:

  一、粗酶液提取:

  1、 細菌、細胞或組織樣品的制備:

  細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

  組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入

  1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

  2、 血清(漿)樣品:直接檢測。二、測定步驟:

  1、分光光度計預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長至470nm,蒸餾水調(diào)零。

  2、測定將試劑一、二和三 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)放置10min。

  3、樣本測定表

  試劑名稱(µL)測定管

  樣本15

  蒸餾水270

  試劑一520

  試劑二130

  試劑三135

  在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑,立即混勻并計時,記錄470nm下30s 時的吸光值

  A1和1min30s后的吸光值A(chǔ)2。計算ΔA=A2-A1。

  注意:

  a.若一次性測定樣本較多,可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液,在 37℃(哺乳動物) 或 25℃(其它物種)放置10min 以上,測定時加入15µL 樣本和1055µL 混合液測定。

  b.如果ΔA 小于0.005,可將反應(yīng)時間延長到5min。如果ΔA 大于0.5,可將樣本用提取液稀釋后測定,計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

  三、POD 活性計算:

  1、 血清(漿)POD 活性

  單位定義:每mL血清(漿)在每mL 反應(yīng)體系中每分鐘A470 變化0.01 為一個酶活力單位。計算公式:POD(U/mL)=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.01÷T =7133×ΔA

  2、 組織、細菌或細胞 POD 活性

  (1)按樣本蛋白濃度計算

  單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。

  POD(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr

  (2)按樣本鮮重計算

  單位定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。

  POD(U/g鮮重)=ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W

  (3)按細菌或細胞數(shù)量計算

  單位定義:每1萬個細菌或細胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化0.01為一個酶活力單位。

  POD(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V 樣總)÷0.01÷T=14.27×ΔA

  V反總:反應(yīng)體系總體積,1.07mL;V樣:加入樣本體積,0.015mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,1min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細菌或細胞總數(shù),500萬。

標簽:過氧化物酶 POD試劑盒 檢測試劑盒 本生試劑盒

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原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司

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