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技術(shù)文獻(xiàn)

豬β干擾素(IFN-β)ELISA試劑盒使用說明書 2023動態(tài)已更新
閱讀次數(shù):15271 發(fā)布時間:2023/8/25 10:25:32
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  豬β干擾素(IFN-β)ELISA試劑盒使用說明書

  本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中豬β干擾素(IFN-β)的含量。BUNSEN本生試劑盒

  有效期:6個月

  保存條件:2-8℃

  本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷

  實驗原理

  試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被豬β干擾素(IFN-β)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬β干擾素(IFN-β)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

  樣本處理及要求

  1. 血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

  4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  注:標(biāo)本溶血會影響檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。

  標(biāo)本處理

  1. 本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé),不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請使用者使用充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。

  2. 實驗應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量,如果標(biāo)本濃度過高,應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。

  3. 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進(jìn)行預(yù)實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。

  4. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差。

  5. 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。

  6. 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。

  7. 建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏差。

  需要而未提供的試劑和器材

  1.酶標(biāo)儀(450nm)

  2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  3.37℃恒溫箱

  4.蒸餾水或去離子水

  備注:

  1. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:64、32、16、8、4、0 pg/mL

  2. 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗,標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實驗。

  注意事項

  1.嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

  2.洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

  3.消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

  4.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

  5.避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。

  6.在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。

  7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

  8.任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

  9.不能使用過期產(chǎn)品。

  10.如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

  試劑準(zhǔn)備

  試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

  20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

  操作步驟

  1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

  2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

  3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

  4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

  6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

  實驗結(jié)果計算

  以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。

  試劑盒性能

  1. 檢測范圍:2 pg/mL – 64 pg/mL。

  2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于0.1 pg/mL。

  3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

  4. 重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。

  說明

  1. 由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。

  2. 終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。

  3. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實驗操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。

  4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能檢測效果,不能混用其他商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到的檢測結(jié)果。

  豬β干擾素1elisa試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。

原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司

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