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　　血清的制備與使用!

　　、血清的制備方法問題。

　　1、問：我的實驗需要自己制備些血清用于培養(yǎng)細胞，有沒有人知道用于培養(yǎng)細胞的血清需要怎樣的制備過程?

　　答：自己制備血清當心污染啊。如果無菌條件好的話，用靜置析出方法就行。

　　2、問：般我們用得胎牛血清用還要滅活，我想用大鼠的血，不知道要不要滅活?

　　答：你直接把采來的血液在離心管里4℃過夜，離心，取上清，在無菌過濾，也可滅活，然后分裝凍存，用時再配。

　　3、問：如果滅活會不會對血清中的些因子有損傷?

　　答：加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學(xué)研究、培養(yǎng)ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。滅活般不會對血清中的些因子損傷的。

　　二、心肌細胞原代培養(yǎng)時血清的使用問題。

　　1、問：在進行心肌細胞原代培養(yǎng)時，需要用含血清的培養(yǎng)基中止胰酶的消化作用，我現(xiàn)在使用的是含血清10%的培養(yǎng)液，但近日看北醫(yī)個細胞培養(yǎng)的課件發(fā)現(xiàn)，有用1%血清培養(yǎng)液進行中止消化的，想問下，1%的是否可以，效果是否有保證?這樣確實能節(jié)省不少血清的。

　　答：關(guān)于心肌細胞元代培養(yǎng)的FBS問題：

　　(1)1%的血清完全培養(yǎng)基可不可以，得看你胰酶的用量。但是在心肌細胞元代培養(yǎng)就不行。 10%的FBS完全培養(yǎng)基效果都不太好，開始心肌細胞元代培養(yǎng)需要高濃度的FBS，20%左右，但這就有出現(xiàn)另個問題，在FBS完全培養(yǎng)基中，成纖維細胞呈優(yōu)勢細胞，須得在培養(yǎng)基加入適量的BrdU以抑制其生長，純化心肌細胞。

　　(2)FBS的作用不僅僅是拿來中和胰酶，只是FBS中的些蛋白質(zhì)如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用。

　　(3)元代心肌細胞培養(yǎng)的FBS使用，有講究：剛開始使用20%左右的高濃度的FBS，后逐漸遞減為無血清的DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng)。

　　2、問：我胰酶的用量是0.08% ，并混和了0.08%的膠原酶。FBS要高濃度遞減是否是說的在細胞培養(yǎng)中啊，難道在消化時終止也需要如此高的濃度嗎，還有，我的BRDU只用到48小時就不用了，因為擔心其損傷太大，可以持續(xù)用多久呢?

　　答：我用10%FBS終止的，然后差速1h，然后還是用10%FBS的HG-dmem養(yǎng)的，沒有用brdu，心肌細胞還是比較多和穩(wěn)定的，我第3天就可以用，第2天晚上看就會有搏動。

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