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　　1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)酶聯(lián)免疫分析(ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

　　本試劑盒僅供研究使用.

　　使用目的：

　　本試劑盒用于測(cè)定血清,血漿及相關(guān)液體樣本中1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)的含量.

　　實(shí)驗(yàn)原理

　　本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定標(biāo)本中1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)水平.用純化的1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG),和HRP標(biāo)記的1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)抗原,使它們競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,,經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色.樣本顏色的深淺和樣品中的1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)的含量呈負(fù)相關(guān).用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)的含量.

　　試劑盒組成：

　　130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶

　　8標(biāo)準(zhǔn)品S1(1600pg/ml)0.5ml×1瓶

　　2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶標(biāo)準(zhǔn)品S2(800pg/ml)0.5ml×1瓶

　　3酶標(biāo)包被板12孔×8條標(biāo)準(zhǔn)品S3(400pg/ml)0.5ml×1瓶

　　4顯色劑A液6ml×1瓶標(biāo)準(zhǔn)品S4(200pg/ml)0.5ml×1瓶

　　5顯色劑B液6ml×1瓶標(biāo)準(zhǔn)品S5(100pg/ml)0.5ml×1瓶

　　6終止液6ml×1/瓶9說(shuō)明書(shū)1份

　　7樣品稀釋液6ml×1/瓶10封板膜2張

　　標(biāo)本要求

　　1.標(biāo)本處理：(1)水樣 采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次,再經(jīng)玻璃纖維過(guò)濾后,備查

　　(2)組織 樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提,或按相關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn).若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,備查

　　2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性.

　　操作步驟

　　1. 加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔 空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同) 待測(cè)樣品孔.在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加50微升,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍).加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻.

　　2. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外.

　　3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘.

　　4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30后棄去,如此重復(fù)5次,拍干.

　　6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

　　7. 終止：每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色).

　　8. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值). 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行.

　　計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度.

　　注意事項(xiàng)

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存.

　　2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果.

　　3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差.一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣.

　　4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔.如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5).

　　5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.

　　6.底物請(qǐng)避光保存.

　　7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

　　8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理.

　　9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用.

　　檢測(cè)范圍：

　　30pg/ml-1800pg/ml

　　規(guī)格：

　　96人份/盒

　　保存條件及有效期

　　1.試劑盒保存：;2-8℃.

　　2.有效期：6個(gè)月

　　1-3-β-D葡聚糖試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來(lái)。微孔板

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