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　　大家來了解下，細胞凍存的注意事項!
 

　　細胞凍存是利用細胞凍存管，將細胞放在低溫環(huán)境，減少細胞代謝，以便儲存的一種技術。細胞凍存是細胞保存的主要方法，起到了細胞保種的作用。不妨來看看BUNSEN本生小編的詳解：

　　細胞凍存與復蘇：

　　一般來說，細胞進行轉(zhuǎn)移，的策略是進行低溫保存，而細胞深低溫保存的基本原理是：在-70℃以下時，細胞內(nèi)的酶活性均已停止，即代謝處于停止狀態(tài)，故而可以保存

　　1、從增殖期到形成致密的單層細胞以的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存，但為對數(shù)生胞。在凍存天盡量換培養(yǎng)液;

　　2、將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷;

　　3、凍存和復蘇盡量用新配制的培養(yǎng)液。

　　細胞凍存：

　　目細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由冰晶形成的細胞損傷。

　　1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌種保存很少用于細胞凍存。

　　2、取對數(shù)生的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中。

　　3、離心1000 rpm,5 min.

　　4、去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細胞的終密度為5x10^6/ml~1x10^7/ml.

　　5、 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者。

　　6、 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min;當溫度達到-25℃以下時，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

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原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司