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知識問答:凍存試劑、樣品可以室溫或37℃水浴解凍嗎?#2023已更新
閱讀次數(shù):15281 發(fā)布時間:2023/12/11 9:06:04
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  凍存試劑、樣品可以室溫或37℃水浴解凍嗎?

  凍存試劑或樣品的解凍,如果時間比較充裕,建議在冰浴或冰水浴上緩慢解凍。如果時間比較著急,大多數(shù)凍存的試劑或樣品是可 以在室溫或37℃水浴解凍(例如抗生素一些產(chǎn)品不建議客戶37度水浴),但都必須特別小心,必須邊觀察、邊輕輕晃動、邊融解。待 部分溶解后即需從水浴中取出,確保溶解過程中試劑或樣品還是接近0℃的。如果該試劑或樣品在0℃不會結(jié)凍,解凍后可以置于冰浴或冰水浴。

  為了使生物樣品在一定的時間內(nèi)保持穩(wěn)定,人們按不同需求將樣品保存在4℃,-20℃,-80℃ 或溫度更低的冰箱中,或者保存在液氮中。本生本文談?wù)勆飿悠返蜏乇4嬗绕涫莾龃鏁r需要注意的一些問題。

  1. 保存的組織樣品要盡快凍存

  樣品貯存的溫度對有效保存時間的影響很大。選擇合適的貯存方式和貯存溫度很重要。但為了實驗結(jié)果的客觀性,研究者也要充分注意樣品在貯存或固定的處置時間和方式。樣品從開始收獲到固定或低溫保存這段時間,仍有一些生化過程在較快地進行。這些生化反應(yīng)的速度直到樣品被固定或者低溫保存時才顯著降低。這一段時間越短越好。對于手術(shù)切除的組織,熱缺血(warm ischemia)時間越短越好;對于實驗動物,處死取樣時掙扎時間越短越好。這有助于防止因環(huán)境改變而導(dǎo)致基因表達水平或蛋白磷酸化狀態(tài)產(chǎn)生較大變化。一些較復(fù)雜的手術(shù)可能進行幾個小時甚至整天,那么被切割但未被切離的那部分組織可能經(jīng)歷較長的熱缺血時間,從而導(dǎo)致較大的生化變化。為了盡可能減少熱缺血的影響,一些手術(shù)室門放置了液氮容器,組織一旦切下就被投入液氮進行急凍(snap freezing);對于耗時較長的手術(shù),有人先在短時間內(nèi)切下有代表性的小部分組織用于研究,然后再進行耗時較長的切除;有人在條件有,采用了將熱缺血狀態(tài)轉(zhuǎn)為冷缺血(cold ischemia )狀態(tài)的辦法減少樣品的變化。他們先把切下的組織置于冰上或4℃ 冰箱中放置短時間,方便時再將樣品置于-80 ℃冰箱或液氮保存?傊瑥臉悠烽_始采集到被凍存或固定,這段時間越短越好,一般不要超過20分鐘。當(dāng)然不同組織生化過程的變化快慢有異。當(dāng)組織來不及凍存時,可將其剪成小塊,放于組織保存液如RNAsafety?中。

  2. 樣品凍存的優(yōu)缺點

  相比于FFPE樣品,凍存組織的DNA 和RNA的得率高,片段長,質(zhì)量好?捎糜诨蛐酒托乱淮鷾y序等高通量基因組學(xué)檢測。不同于FFPE樣品,凍存組織內(nèi)的蛋白質(zhì)(如酶類)仍然保持生物活性,可用于某些檢測。但對凍存樣品,需要注意一些問題。凍存組織的形態(tài)學(xué)檢測效果有時不如FFPE樣品精細、(例如用于免疫組織化學(xué)檢測時);某些病理組織內(nèi)的一些感染性因子凍存后仍然保持活性,處理這些樣品時需要格外注意;組織樣品中的RNA在-80℃ 凍存時仍然不是穩(wěn)定的,有人觀察到5年后RNA出現(xiàn)降解;核酸、蛋白質(zhì)等大分子經(jīng)過反復(fù)凍融,有可能斷裂成較小片段;凍存耗能較多,需要較多門的空間,成本高昂;當(dāng)凍存設(shè)備發(fā)生故障時,大批珍貴的樣品有可能被破壞,從而導(dǎo)致巨大的損失;當(dāng)用液氮凍存樣品時,還要防范凍傷、液氮容器爆炸及因空間密閉等導(dǎo)致窒息等風(fēng)險。

  3. 凍存溫度的選擇

  已述及,根據(jù)一般的物理化學(xué)規(guī)律,溫度越低,樣品的穩(wěn)定時間越長。在超低溫冰箱面世之,-20℃ 冰箱是常用的低溫貯存工具。實踐證明,-20℃ 時組織內(nèi)的大分子仍然可以被降解。而且,0至-60℃ 是水的結(jié)晶溫度。結(jié)晶容易對細胞和組織的微觀結(jié)構(gòu)造成傷害,一般不在這一溫度范圍來保存組織和細胞。一些經(jīng)過提純的大分子可以在這一溫度范圍內(nèi)短期保存。目,大多數(shù)生物和醫(yī)學(xué)研究機構(gòu)用-80℃ 冰箱或液氮凍存生物樣品。-80℃低于危害性較大的結(jié)晶溫度范圍,也是常用設(shè)備超低溫冰箱能達到的溫度。但在-80℃溫度下,不同的生物樣品的保存時間是不一致的。組織中的DNA可以在-80℃下可以保持數(shù)年或更長時間。組織中的RNA在-80℃下的穩(wěn)定性隨不同組織或細胞而異,但一般不超過5年。一些組織內(nèi)的RNA在-80℃下不到一年就發(fā)生了降解。為了保存組織內(nèi)的RNA,可以將組織切成尺寸小于0.5cm 的小塊,沒入5-10倍體積的RNAsafety?等組織培養(yǎng)液中,置于凍存管內(nèi),冰凍保存。RNAsafety?溶液能夠較好地維持RNA的完整性。甚至那些已知RNA酶含量較高的組織中的RNA也可以在RNAsafety?保存液中得以凍存。

  隨著制冷技術(shù)的,深低溫冰箱已經(jīng)出現(xiàn)在某些實驗室。這類冰箱制冷溫度可達到-150℃。它不需要像液氮罐那樣需要頻繁監(jiān)控液氮消耗情況。箱內(nèi)溫度也比較均勻恒定,但深低溫冰箱降溫速度低于液氮,一旦開啟取放樣品時容易造成較大范圍的溫度波動,溫度恢復(fù)時間也相對較長。另外深低溫冰箱能耗很大,且必須保障供電。

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