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技術(shù)文獻(xiàn)

雞降鈣素(CT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
閱讀次數(shù):15476 發(fā)布時(shí)間:2021/9/3 9:57:52
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  雞降鈣素(CT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

  本試劑盒僅供研究使用。

  檢測范圍:96T

  2.2ng/L -90 ng/L

  使用目的:

  本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中降鈣素(CT)含量。

  實(shí)驗(yàn)原理

  本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中雞降鈣素(CT)。用純化的雞降鈣素(CT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入降鈣素(CT),再與 HRP 標(biāo)記的降鈣素(CT)抗體,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的降鈣素(CT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中雞降鈣素(CT)濃度。

  雞降鈣素(CT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成

  試劑盒組成

  1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶

  3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 ; 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶

  5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 ; 6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶

  7 終止液 6ml×1 瓶; 8 標(biāo)準(zhǔn)品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

  9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶; 10 說明書 1 份

  11 封板膜 2 張; 12 密封袋 1 個(gè)

  標(biāo)本要

  1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能

  馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

  2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過

  (HRP)活性。

  操作步驟

  1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

  2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

  3.溫育:用封板膜封板后 37℃溫育30分鐘。

  4.配液:將 30倍濃 30倍稀釋后備用

  5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜 30后棄去,如此重復(fù) 5次,拍干。

  6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。

  7.溫育:操作同 3。

  8.洗滌:操作同 5。

  9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

  10分鐘.

  10.終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

  11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

  雞降鈣素(CT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總:

  計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo), OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

  注意事項(xiàng)

  1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

  2.濃洗滌液可能會(huì)有析出,雞降鈣素(CT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒稀釋時(shí)可在浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響。

  3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

  4.請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔di一孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

  5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉

  6.底物請避光保存。

  7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)

  8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

  9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

  保存條件及有效期

  1.試劑盒保存:2-8℃。

  2.有效期:6個(gè)月

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