雞凝血因子V(F5)ELISA檢測試劑盒使用說明書_技術(shù)文章

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雞凝血因子V(F5)ELISA檢測試劑盒使用說明書
閱讀次數(shù)：15445 發(fā)布時(shí)間：2021/9/15 11:26:12

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本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

雞凝血因子V(F5)ELISA檢測試劑盒使用說明書

【雞凝血因子V(F5)ELISA檢測試劑盒 試劑盒名稱】

雞凝血因子V(F5)ELISA檢測試劑盒

【雞凝血因子V(F5)ELISA檢測試劑盒 試劑盒用途】

定量雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中凝血因子V(F5)的含量

【雞凝血因子V(F5)ELISA檢測試劑盒檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本加入到預(yù)先包被凝血因子V(F5)透明酶標(biāo)包被板中，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標(biāo)工作液，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中凝血因子V(F5)濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值，計(jì)算樣本中凝血因子V(F5)含量。

【雞凝血因子V(F5)ELISA檢測試劑盒 試劑盒組成】

1	酶標(biāo)包被板	12孔×8條	7	底物夜A	6mL
2	標(biāo)準(zhǔn)品：200ng/ml	0.6mL	8	底物夜B	6mL
3	20倍濃縮洗滌液	20mL	9	終止液	6mL
4	標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液	6mL	10	說明書	1份
5	樣本稀釋液	6mL	11	封板膜	1張
6	酶標(biāo)試劑	6mL	12	密封袋	1個(gè)

備注：標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為：200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml

【雞凝血因子V(F5)ELISA檢測試劑盒需要而未提供的試劑和器材】

1、37℃恒溫箱

2、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

3、精密移液器及一次性吸頭

4、蒸餾水

5、一次性試管

6、吸水紙

【雞凝血因子V(F5)ELISA檢測試劑盒操作步驟】

1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。

4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）。

6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對照孔不加。

7、溫育：重復(fù)4的操作。

8、洗板：重復(fù)5的操作。

9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。

10、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。

12、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。終濃度為實(shí)際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

【雞凝血因子V(F5)ELISA檢測試劑盒 樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉（NaN₃），因?yàn)?/font>疊氮鈉（NaN₃）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。