技術(shù)文獻(xiàn)
小鼠I型膠原蛋白(Col-Ⅰ)ELISA試劑盒
小鼠I型膠原蛋白(Col-Ⅰ)ELISA試劑盒用于測(cè)定小鼠血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中 I 型膠原蛋白(ColⅠ)的含量。
一、產(chǎn)品說明
規(guī)格:96T、48T
試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為 0.95 以上。
2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于 10%和 10% 。
檢測(cè)范圍:1.25 ng/mL - 40 ng/mL
靈敏度:小低檢測(cè)濃度小于 0.1 ng/mL
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存: 2-8℃。
2.有效期: 6 個(gè)月
二、小鼠I型膠原蛋白(Col-Ⅰ)ELISA試劑盒組成
三、樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收 集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次 離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過 程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液, 細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離 心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
四、操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL;。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 100μl,空白孔除外。
4. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。
5. 配液:將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。
6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。
7. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 15 分鐘.
8. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
9. 測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
五、注意事項(xiàng):
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD 值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請(qǐng)避光保存。
注:本產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn),凡購(gòu)買本公司ELISA試劑盒的客戶,均可享受免費(fèi)的ELISA代測(cè)服務(wù)。詳情可詢我司在線客服和經(jīng)理!
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原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司
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