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技術(shù)文獻(xiàn)

大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)ELISA試劑盒使用說明書
閱讀次數(shù):15271 發(fā)布時(shí)間:2024/1/15 10:04:57
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  大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)ELISA試劑盒使用說明書

  本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)的含量。

  有效期:6個(gè)月

  保存條件:2-8℃

  實(shí)驗(yàn)原理

  試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

  樣本處理及要求

  1. 血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  注:標(biāo)本溶血會影響檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。

  需要而未提供的試劑和器材

  1. 酶標(biāo)儀(450nm)

  2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  3. 37℃恒溫箱

  4. 蒸餾水或去離子水

  大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)試劑盒(ELISA)試劑盒組成 名稱96孔配置48孔配置備注

  微孔酶標(biāo)板8孔×12條8孔×6條無

  標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無

  樣本稀釋液6mL3mL無

  檢測抗體-HRP10mL5mL無

  20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進(jìn)行稀釋

  底物A6mL3mL無

  底物B6mL3mL無

  終止液6mL3mL無

  封板膜2張2張無

  說明書1份1份無

  自封袋1個(gè)1個(gè)無

  大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶試劑盒備注:

  1. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:160、80、40、20、10、0 ng/mL

  2. 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

  注意事項(xiàng)

  1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

  2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

  3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

  4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

  5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

  6. 在儲存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

  7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

  8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

  9. 不能使用過期產(chǎn)品。

  10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

  試劑準(zhǔn)備

  試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

  20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

  大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)試劑盒(ELISA)操作步驟

  1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

  2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

  3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

  4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

  6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

  實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

  以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品的濃度。

  大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)試劑盒(ELISA)試劑盒性能

  1. 檢測范圍:5 ng/mL – 160 ng/mL。

  2. 靈敏度:檢測濃度小于1.0 ng/mL。

  3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

  4. 重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。

  大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。

原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司

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