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干貨分享:ELISA實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng) 2024動(dòng)態(tài)已更新《采購(gòu)/推薦》
閱讀次數(shù):15283 發(fā)布時(shí)間:2024/1/30 9:53:21
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  干貨分享:ELISA實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

  1、固相載體選擇

  聚苯乙/烯:具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或抗原吸附其上后仍保留原來(lái)的免疫學(xué)活性。

  聚氯乙/烯:聚氯乙/烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙/烯高,但空白值也略高。

  良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間性能相近。

  2、包被

  ①板孔的選擇:ELISA別的微孔板。

 、诳贵w選擇:選擇支持ELISA實(shí)驗(yàn)的抗體,根據(jù)推薦濃度稀釋或摸索適濃度。

  ③包被緩沖液:pH9.6碳酸鹽緩沖液或pH7.2磷酸鹽緩沖液。

  ④包被溫度:2-8 ℃過(guò)夜包被或室溫(37℃)包被2h。

 、莅粷舛龋喊粷舛入S載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化。一般包被濃度為10ug/ml-20ug/ml。

  3、封閉

 、侔恢笠欢ㄒ⒓捶忾](封閉非特異性抗體)。

 、谶x擇效果較好的封閉劑(細(xì)胞培養(yǎng)BSA、Tween等)。

  4、加樣及孵育

 、偌訕訒r(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。

 、诜跤臅r(shí)間及溫度參考試劑盒說(shuō)明書(shū)。如有條件,建議加樣孵育時(shí)使用shaker震蕩儀,推薦軌道直徑3mm,轉(zhuǎn)速在500±50rpm。

 、蹤z測(cè)抗體、酶標(biāo)物的稀釋比例、孵育溫度、孵育時(shí)間嚴(yán)格根據(jù)說(shuō)明書(shū)提示。

 、芟窗鍖(duì)于ELISA來(lái)說(shuō),是其關(guān)鍵的一步,ELISA的特異性。

 、莘獍迥ひ欢ㄒ淮我粨Q,切勿二次甚至多次使用,以防交叉污染。

  5、顯色和終止

 、偈褂眯铏z查,底物在加入96孔板之應(yīng)為無(wú)色透明。

 、陲@色底物需現(xiàn)配現(xiàn)用,避免污染。

 、鄯跤龝r(shí)間,說(shuō)明書(shū)上為參考范圍,但具體需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件自行摸索。

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