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技術(shù)文獻(xiàn)

BUNSEN本生闡述:豬免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒洗滌方法
閱讀次數(shù):15268 發(fā)布時間:2024/2/29 10:02:10
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  豬免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒洗滌方法:

  1. 自動洗板機(jī):每孔加入洗滌液350μl,注入與吸出間隔60。洗板5次。

  2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350μl,浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。

  實(shí)驗(yàn)開始,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,并盡量避免起泡。

  1.加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育2小時。為實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液
 


 

  2.棄去液體,甩干,每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用15分鐘內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育1小時。

  3.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約350μl /每孔,甩并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

  干4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用15分鐘內(nèi)配制)100μl,加上覆膜,37℃溫育1小時。

  5.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。

  6.每孔加底物溶液100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長,但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時,即可終止)。

  7.每孔加終止液50μl,終止反應(yīng),此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。

  8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提打開酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測程序。

  9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。

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原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司

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