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　　本生淺談：細胞的培養(yǎng)過程與影響生長因素介紹!

　　細胞的生長，主要是指細胞體積的增大，細胞分化完成后并不是所有的細胞都有生長的過程，大多數的組織器官都是通過不斷的細胞分裂以增加細胞數量的方式來實現(xiàn)器官生長，只有很少數細胞(像神經元細胞)是通過增大細胞體積的方式來實現(xiàn)器官生長的，隨著個體的不斷發(fā)育，神經元細胞，特別是軸突的部分也要不斷的伸長。

　　培養(yǎng)過程

　　培養(yǎng)細胞生長過程：潛伏期→指數增生期→停滯期

　　、潛伏期(latent phase)：

　　細胞接種后,先經過個在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)的懸浮期.此時,細胞質回縮, 胞體呈圓球形.然后細胞貼附于載體表面,稱貼壁,懸浮期結束. 細胞貼壁速度與細胞種類,培養(yǎng)基成分,載體的理化性質等密切相關。般情況下，原代培養(yǎng)細胞貼壁速度慢,可達10-24 小時或更多, 而傳代細胞系貼壁速度快, 通常10-30 分鐘即可貼壁。細胞貼壁后還需經過個潛伏階段，才進入生長和增殖期.原代培養(yǎng)細胞潛伏期，約24-96 小時或更長, 連續(xù)細胞系和腫瘤細胞潛伏期短，僅需6-24 小時。

　　二、指數增生期(logarithmic growth phase)

　　這是細胞增殖旺盛的階段，分裂相細胞增多。指數增生期細胞分裂相數量可作為判定細胞生長是否旺盛的個重要標志。通常以細胞分裂相指數(Mitotic index, MI)表示，即細胞群中每1000 個細胞中的分裂相數。般細胞的分裂指數介于0.1%-0.5%，原

　　代細胞分裂指數較低，而連續(xù)細胞和腫瘤細胞分裂相指數可高達3%-5%。

　　三、停滯期(Stagnate phase)

　　細胞數量達到飽和密度后，如不及時進行傳代，細胞就會停止增殖，進入停止期。此時細胞數持平，故也稱平臺期(Plateau phase)。停滯期細胞雖不增殖，但仍有代謝活動。如不進行分離傳代，細胞會因培養(yǎng)液中營養(yǎng)耗盡、代謝產物積聚、pH 下降等因素中毒，出現(xiàn)形態(tài)改變，貼壁細胞會脫落，嚴重的會發(fā)生死亡，因此，應及時傳代。

　　影響因素

　　細胞生長受溫度、滲透壓等外界因素的影響。

　　溫度

　　般哺乳類及禽類細胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃。溫度過高或過低都會影響到細胞的生長。細胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強，在低溫下，細胞的代謝活力及核分裂降低。溫度不低于0℃時，雖影響細胞代謝，但并無傷害作用;把細胞置于25～35℃時，細胞仍能生存和生長，但速度減緩;放在40℃數小時后，再置回37℃培養(yǎng)細胞仍能繼續(xù)生長。但如果在40℃下暴露時間太長，對細胞生長不利，甚至變圓脫落于瓶壁。若溫度過低，在降到冰點以下時，細胞因胞外水和胞質結冰而受損死亡。但若向培養(yǎng)液中加入甘油或二甲亞砜等保護劑，封入安瓿中后，置于液氮中，可起保護作用，此時細胞可耐受-70℃以下溫度，能長期儲存，解凍后細胞復蘇，仍能繼續(xù)生長增殖，細胞生物性狀不受任何影響。此為保存細胞的主要手段。

　　滲透壓

　　細胞在高滲溶液或低滲溶液中，可以立即發(fā)生皺縮或腫脹、破裂。所以，滲透壓是體外培養(yǎng)細胞的重要條件之。哺乳動物和其他動物組織細胞體外培養(yǎng)的滲透壓的維持主要與NaCl有關，但不能忽視其他電介質滲透壓的關系。滲透壓與單位體積溶媒內溶質的分子數和離子數成正比。為此，按定比例控制培養(yǎng)液中離子平衡，維持正常滲透壓是很重要的。這不僅是為了維持細胞張力，而且是為了調節(jié)細胞的代謝。因為細胞外離子輸送和離子濃度改變著其他營養(yǎng)物質的輸送(如氨基酸、蔗糖等)，直接影響細胞基本合成系統(tǒng)。

　　氣體環(huán)境和pH

　　體外培養(yǎng)細胞需要理想的氣體環(huán)境，氧和二氧化碳是細胞生存必須的條件之。氧參加細胞的三羧酸循環(huán)，產生能量以供給細胞生長、增殖和合成各種所需成分。有些細胞在低氧條件下，可借糖酵解取得能量，但多數細胞低氧時不能生存。氧張力通常維持在略低于大氣狀態(tài)，若氧分壓超過大氣中氧的含量可能對有些細胞有害。采用開放式培養(yǎng)時(碟皿或培養(yǎng)瓶松蓋培養(yǎng)或培養(yǎng)板培養(yǎng))，般要把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳的混合氣體環(huán)境中。

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