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什么是細(xì)胞凍存?細(xì)胞凍存需要注意哪些事項(xiàng)?
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的重要方法,在生化及臨床研究工作中十分重要。細(xì)胞凍存是指利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于低溫環(huán)境中,使細(xì)胞代謝率降低,暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài),并將其細(xì)胞生物學(xué)特性保存起來(lái),然后在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞的過(guò)程。所以,細(xì)胞凍存包括凍存和復(fù)蘇兩個(gè)環(huán)節(jié)。下面是天津本生技術(shù)小編的詳解:
細(xì)胞凍存可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而導(dǎo)致的細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用。所以細(xì)胞凍存的操作十分關(guān)鍵,那么細(xì)胞凍存需要注意哪些事項(xiàng)呢?
先為了大限度的保存細(xì)胞活力,細(xì)胞凍存遵循慢凍快融的原則。
細(xì)胞凍存的注意事項(xiàng):
1、細(xì)胞凍存一天好換一次培養(yǎng)液,并觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情形。保證細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)良好,無(wú)污染,且活細(xì)胞百分比為 90%以上。
2、凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑,DMSO應(yīng)為試劑等,濃度為10%。
3、細(xì)胞應(yīng)緩慢冷凍,可使用可控制降溫速度的低溫冰箱或者低溫冷凍容器,使溫度每分鐘大約降低 1°C。
4、將冷凍的細(xì)胞于–70℃以下溫度儲(chǔ)存,裝有冷凍細(xì)胞的凍存管可浸于液氮或者在液氮上方的氣相空間內(nèi)保存。
細(xì)胞復(fù)蘇的注意事項(xiàng):
1、取細(xì)胞時(shí)應(yīng)做好防護(hù)措施,帶好防凍手套,護(hù)目鏡。防止細(xì)胞凍存管因氣溫急劇上升發(fā)生炸裂。
2、必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化,避免復(fù)蘇溫度太慢,造成細(xì)胞的損傷。如果凍存管管壁較厚,隔熱效果較好,可以適當(dāng)提高水浴溫度(37℃~40℃)。
3、提預(yù)定超凈臺(tái),減少?gòu)?fù)蘇后插在冰盒里等待的時(shí)間。
后,細(xì)胞凍存過(guò)程中,所有與細(xì)胞接觸的溶液和設(shè)備均應(yīng)為無(wú)菌狀態(tài)。必須采用正確的無(wú)菌技術(shù),并且在層流通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。
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