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　　免疫熒光染色|七色多重熒光染色試劑盒 (六標七色)

　　原理介紹:酪酰胺信號放大(TSA，Tyramidesignalamplification)技術是一類利用辣根過氧化酶(HRP)對靶蛋白進行標記的酶學檢測方法，類似常規(guī)免疫組化的DAB顯色方法，TSA技術同樣采用HRP標記的二抗，同樣有對應的“顯色”步驟(HRP催化加入反應體系的酪胺熒光素底物，產(chǎn)生活化熒光底物，活化底物可與抗原上的酪氨酸等殘基共價結合，使樣品上穩(wěn)定的共價結合酪胺熒光素。之后用熱修復法洗去非共價結合的一抗-二抗-HRP復合物，重復下一種一抗-hrp二抗來第二輪孵育，換另一種酪胺熒光素底物，如此往復就可實現(xiàn)多重標記。

　　TSA詳細原理是利用酪胺Tyramide的過氧化物酶反應(酪胺鹽在HRP催化H202下形成共價鍵結合位點)，產(chǎn)生大量的酶促產(chǎn)物，該產(chǎn)物能與周圍的蛋白殘基(包括色氨酸、組氨酸和酪氨酸殘基)結合，這樣在抗原-抗體結合部位就有大量的熒光素沉積，結果使其檢測信號得到10-100倍增強。簡單來說，用這種方法做多重免疫熒光是利用二抗上帶有的HRP(而不是直接偶聯(lián)熒光素)，來催化后續(xù)添加入體系的非活性熒光素。

　　熒光素在HRP和過氧化氫的作用下被活化，跟臨近蛋白的酪氨酸殘基共價偶聯(lián)，使得蛋白樣品與熒光素穩(wěn)定結合。然后微波或煮沸或者水浴等熱修復處理，一輪非共價結合的抗體被洗掉，共價結合的熒光素穩(wěn)定共價結合在樣本切片蛋白上。再換個一抗來第二輪孵育，周而復始。等到所有抗體孵育結束，熒光素都結合好后，后去檢測結果。由于每次體系中都只有單一抗體孵育，因此無需擔心抗體交叉反應，以及一抗二抗種屬匹配問題，大大減少了實驗設計時不同種屬抗體選擇匹配的限制。也就是說，如果用TSA技術，同一張片子上所有的靶標都可以選用特異性高的兔單克隆抗體。搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以進行實驗，而且信號放大的倍數(shù)大大增強。本公司開發(fā)的試劑盒具體酪胺熒光染料為以下其中一種或者多種：480，520，570，620，690，780。此試劑盒中的熒光染料可單獨或配合使用�？梢詫崿F(xiàn)單標、雙標、三標以及更多重熒光放大/多重同源抗體熒光標記等功能，大豐富了此試劑盒的內(nèi)涵。

　　BUNSEN本生詳述試劑盒組成：

　　480熒光染料(即用型，5mL),-20℃;520熒光染料(綠光)(即用型，5mL),-20℃;570熒光染料(紅光)(即用型，5mL)，-20℃;-620熒光染料(即用型，5mL)，-20℃;690熒光染料(即用型，5mL)，-20℃;780熒光染料(即用型，5mL)，-20℃;TSA+增強劑，100ul，-20℃(可選);

　　高敏多聚hrp山羊抗兔二抗(20mL)4℃。

　　備注：480熒光染料、520熒光染料、570熒光染料、620熒光染料、690熒光染料、780熒光染料在-20度下，均為固體，使用之需解凍。

　　TSA+增強劑使用方法：TSA+增強劑能夠進一步增強熒光信號放大液的放大信號5-10倍，TSA+增強劑：熒光放大液=1:500，使用TSA+增強劑不是必須的選項，可以根據(jù)具體的情況選擇添加或者不選擇添加。

　　操作流程：

　　1、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲benⅠ15min-二甲ben Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ。取出放在通風廚內(nèi)，酒精晾干后放入自來水中稍洗，蒸餾水洗。

　　2、抗原修復：組織切片置于盛滿PH9.0EDTA堿性抗原修復液或者PH6.0檸檬酸修復緩沖液的修復盒中于微波爐內(nèi)進行抗原修復(也可以用高壓1-2min100度水煮15min95度水浴20min

　　七色多重熒光染色試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。