詳細內(nèi)容

　　腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒

　　僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

　　本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中大鼠(Acetyl-Foxo3a)的含量。

　　有效期：6個月

　　保存條件：2-8℃

　　[實驗原理]

　　試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被腫瘤壞死因子α捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腫瘤壞死因子α呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，計算樣品濃度。

　　[樣本處理及要求]

　　1. 血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果)，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

　　4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　注：標(biāo)本溶血會影響檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。

　　[需要而未提供的試劑和器材]

　　1.酶標(biāo)儀(450nm)

　　2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　3.37℃恒溫箱

　　4.蒸餾水或去離子水

　　[試劑盒組成]

　　1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶

　　3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 ; 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶

　　5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 ; 6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶

　　7 終止液 6ml×1 瓶; 8 標(biāo)準品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

　　9 標(biāo)準品稀釋液 1.5ml×1 瓶; 10 說明書 1 份

　　11 封板膜 2 張; 12 密封袋 1 個

　　腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒 【備注】：

　　1. 標(biāo)準品濃度依次為：600、300、150、75、37.5、18.75 ng/mL

　　2. 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過標(biāo)準品濃度時，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進行適當(dāng)稀釋后再進行實驗。

　　[注意事項]

　　1.嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

　　2.洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果。在加入底物確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

　　3.消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

　　4.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

　　5.避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。

　　6.在儲存和溫育時避免強光直接照射。

　　7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

　　8.任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

　　9.不能使用過期產(chǎn)品。

　　10.如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

　　[試劑準備]

　　試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

　　20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

　　[操作步驟]

　　1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　2. 設(shè)置標(biāo)準品孔和樣本孔，標(biāo)準品孔各加不同濃度的標(biāo)準品50μL;

　　3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

　　4. 除空白孔外，標(biāo)準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

　　5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。

　　6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，大鼠(Acetyl-Foxo3a)試劑盒在450nm波長處測定各孔的OD值。

　　[實驗結(jié)果計算]

　　以所測標(biāo)準品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度值。

　　(此圖僅供參考)

　　腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒[性能]

　　1. 檢測范圍：18.75 ng/mL – 600 ng/mL。

　　2. 靈敏度：檢測濃度小于1.0 ng/mL。

　　3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

　　4. 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

更新時間：2024/11/4 9:42:56

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