詳細(xì)內(nèi)容
點擊次數(shù):157 發(fā)布時間:2023/7/31 11:31:19
考馬斯亮藍(lán)G250染料試劑
規(guī)格:100ml 500ml
產(chǎn)品名稱考馬斯亮藍(lán)G250染料試劑
保質(zhì)期3個月
保存條件RT 避光
簡介:
Bradford法也稱考馬斯藍(lán)染色法(coomassie blue staining)?捡R斯亮藍(lán)G-250測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)G-250結(jié)合在2 min左右的時間內(nèi)達(dá)到平衡,完成反應(yīng)十分迅速,其結(jié)合物在室溫下1 h內(nèi)保持穩(wěn)定。該反應(yīng)非常靈敏,可測微克蛋白質(zhì)含量,所以是一種比較好的蛋白質(zhì)定量法?捡R斯亮藍(lán)G250在于它在三中不溶而成膠體,能選擇地染色蛋白而幾乎無本底色。所以常用于需要重復(fù)性好和穩(wěn)定的染色,適于作定量分析。其染色原理是通過與蛋白質(zhì)內(nèi)的氨基和羧基基團間的作用力,考馬斯亮藍(lán)與蛋白質(zhì)形成強但非共價鍵連接的復(fù)合物。蛋白-染料復(fù)合物的形成穩(wěn)定染料攜帶的負(fù)電荷陰離子(如磺酸基),從而產(chǎn)生在膜上或者膠上肉眼可見的藍(lán)色。
考馬斯亮藍(lán)G250染料試劑主要由考馬斯亮藍(lán)G250、乙醇、磷酸組成,多用于溶液體系中蛋白的定量分析,其特點在于對蛋白樣品中可能存在的大多數(shù)鹽、溶劑、緩沖液、硫醇、金屬螯合劑、還原性物質(zhì)等均不排斥,反應(yīng)靈敏。該產(chǎn)品僅適用于科研實驗,不可做他用。
操作步驟(僅供參考):
1、 稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)(一般為BSA 5 mg/ml)使其終濃度為0.5 mg/ml。注意:蛋白樣品在什么溶液中,蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)用什么溶液稀釋,也可以用 0.9%NaCl或PBS稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)。
2、 將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20 ul加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)孔中,加蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液補足至20 ul。
3、 加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中,補加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液至20 ul。
4、 各孔加入200 ul考馬斯亮藍(lán)G250染料試劑室溫放置。
5、 酶標(biāo)儀測定595 nm波長處的吸光值,560~610 nm之間的波長也可。
6、 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中的蛋白濃度。
注意事項:
1、 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)溶解于什么樣的稀釋液中,否者待測蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致,有可能導(dǎo)致測定不準(zhǔn)確。
2、 需可檢測560~610 nm之間波長的酶標(biāo)儀一臺,佳檢測波長為595 nm。
3、 建議每次測定時都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4、 如果沒有酶標(biāo)儀,也可以使用普通的分光光度計測定,但測定時,考慮根據(jù)比色皿的小檢測體積。
5、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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更新時間:2024/11/15 8:45:52
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